C57小鼠黑色素瘤瘤株
C57小鼠黑色素瘤瘤株核心產(chǎn)品為從C57BL/6小鼠黑色素瘤組織中分離、永生化構(gòu)建的穩(wěn)定細(xì)胞株,核心提供B16、B16-F10兩種常用亞型(B16為基礎(chǔ)亞型,B16-F10侵襲轉(zhuǎn)移能力更強(qiáng)),可提供不同傳代次數(shù)的細(xì)胞系,配套提供細(xì)胞培養(yǎng)說明書、細(xì)胞凍存液、復(fù)蘇液及質(zhì)量檢測(cè)報(bào)告(含細(xì)胞純度、黑色素標(biāo)志物鑒定、支原體檢測(cè)、相關(guān)基因表達(dá)檢測(cè)等),同時(shí)提供細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)支持及定制化實(shí)驗(yàn)服務(wù)。該瘤株采用胰dan白酶消化、密度梯度離心等成熟分離技術(shù),從C57BL/6小鼠黑色素瘤組織中去除正常黑色素細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等雜細(xì)胞,通過黑色素瘤特異性標(biāo)志物(如MAGE-A3、MART1、PAX3、酪an酸酶)鑒定,確保細(xì)胞純度≥98%,無支原體、細(xì)菌、真菌污染,細(xì)胞活性≥90%。該瘤株適配常規(guī)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)條件,可穩(wěn)定傳代,生物學(xué)特性穩(wěn)定,保留其惡性增殖、黑色素分泌及侵襲轉(zhuǎn)移潛能,廣泛應(yīng)用于黑色素瘤發(fā)病機(jī)制研究、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)、靶向藥物篩選、免yi治療相關(guān)實(shí)驗(yàn)及基因功能驗(yàn)證等科研場(chǎng)景,依托C57BL/6小鼠補(bǔ)體活性高、干擾素產(chǎn)量較高、易誘發(fā)免疫耐受性的遺傳特性,適配腫瘤學(xué)、免疫學(xué)相關(guān)研究,為腫瘤學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域的科研探索、藥物研發(fā)提供核心細(xì)胞模型,適配科研院所、生物醫(yī)藥企業(yè)、高校實(shí)驗(yàn)室及各級(jí)醫(yī)院腫瘤科科研部門。
分離與培養(yǎng)原理
該瘤株的分離與培養(yǎng)核心基于腫瘤組織消化分離及永生化技術(shù),結(jié)合C57小鼠黑色素瘤細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)、惡性增殖的生物學(xué)特性,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的精準(zhǔn)分離與體外穩(wěn)定培養(yǎng),具體核心步驟分為分離和培養(yǎng)兩部分:一是細(xì)胞分離原理,選取接種黑色素瘤細(xì)胞后形成腫瘤的健康C57BL/6小鼠,無菌操作下取出腫瘤組織,碎至1mm3大小的組織塊,加入0.25%胰dan白酶-EDTA消化液(B16-F10可選用不含EDTA的yi酶),37℃水浴消化20-30分鐘,期間每5-10分鐘搖動(dòng)一次,消化完成后加入含胎牛血清的培養(yǎng)基終止消化,用PBS漂洗2-3次,800r/min離心5分鐘棄去上清液,通過密度梯度離心去除雜細(xì)胞,利用黑色素瘤特異性標(biāo)志物篩選,獲得高純度該瘤株;二是細(xì)胞培養(yǎng)原理,將分離獲得的該瘤株接種于培養(yǎng)瓶中,使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基,添加青mei素、鏈mei素雙抗,置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),培養(yǎng)基可維持細(xì)胞的惡性增殖活力,同時(shí)保留其黑色素分泌、侵襲轉(zhuǎn)移及相關(guān)基因表達(dá)特性,定期更換培養(yǎng)基(每2-3天一次),待細(xì)胞融合度達(dá)80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代,確保細(xì)胞正常生長(zhǎng),避免細(xì)胞老化或凋亡。此外,所有分離培養(yǎng)的該瘤株均需經(jīng)過細(xì)胞活性檢測(cè)、純度鑒定、黑色素標(biāo)志物檢測(cè)及污染檢測(cè),確保細(xì)胞的穩(wěn)定性和可靠性,為后續(xù)科研實(shí)驗(yàn)提供優(yōu)質(zhì)細(xì)胞模型,同時(shí)可通過優(yōu)化培養(yǎng)體系,模擬體內(nèi)黑色素瘤微環(huán)境,提升細(xì)胞體外培養(yǎng)的穩(wěn)定性。
產(chǎn)品特點(diǎn)
該瘤株以“純度高、活性強(qiáng)、特征典型、適配性廣"為核心,貼合C57小鼠遺傳背景及黑色素瘤相關(guān)研究的實(shí)際科研需求,核心特點(diǎn)突出,匹配科研實(shí)驗(yàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞模型的核心訴求。一是遺傳背景均一,源自近交系C57BL/6小鼠,基因純合度高,個(gè)體差異小,可顯著提升實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可重復(fù)性與可比性,同時(shí)繼承該品系補(bǔ)體活性高、干擾素產(chǎn)量較高、易誘發(fā)免疫耐受性的特性,適配免yi治療相關(guān)研究;二是細(xì)胞純度高、無污染,細(xì)胞純度≥98%,經(jīng)黑色素瘤特異性標(biāo)志物鑒定及嚴(yán)格污染檢測(cè),無支原體、細(xì)菌、真菌及雜細(xì)胞污染,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性;三是核心特征典型,不同亞型各具特色,B16瘤株惡性度適中,適用于基礎(chǔ)機(jī)制研究,B16-F10瘤株侵襲轉(zhuǎn)移能力強(qiáng),適用于轉(zhuǎn)移相關(guān)實(shí)驗(yàn),均具備黑色素分泌能力,可通過黑色素標(biāo)志物快速鑒定,同時(shí)存在蛋白4.1B表達(dá)缺失等典型分子特征,可精準(zhǔn)模擬臨床黑色素瘤的病理狀態(tài);四是生物學(xué)特性穩(wěn)定,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,貼壁性強(qiáng)、增殖迅速,可穩(wěn)定傳代30代以上,傳代過程中惡性表型、黑色素分泌及侵襲轉(zhuǎn)移特性不丟失,符合科研實(shí)驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)可重復(fù)性的核心要求;五是適配性強(qiáng),可適配體外常規(guī)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)、MTT增殖實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲/遷移實(shí)驗(yàn)、平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)、Western blotting檢測(cè)、免疫熒光染色、基因轉(zhuǎn)染、藥物敏感性實(shí)驗(yàn)等多種實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景,同時(shí)可用于C57BL/6小鼠體內(nèi)移植實(shí)驗(yàn),構(gòu)建皮下移植瘤或肺轉(zhuǎn)移模型,助力體內(nèi)外協(xié)同研究;六是操作便捷,提供完整的細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、凍存說明書,細(xì)胞復(fù)蘇成活率高(≥90%),無需復(fù)雜實(shí)驗(yàn)設(shè)備,常規(guī)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)條件即可滿足生長(zhǎng)需求,適配各類實(shí)驗(yàn)室操作,同時(shí)提供黑色素標(biāo)志物檢測(cè)、基因表達(dá)驗(yàn)證等專屬技術(shù)指導(dǎo)。
適用實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景
該瘤株專為C57小鼠背景黑色素瘤相關(guān)科研實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),適配多種體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景,核心應(yīng)用包括:一是黑色素瘤發(fā)病機(jī)制研究,利用該瘤株探究黑色素瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,分析蛋白4.1家族、MAGE-A3、MART1等相關(guān)基因及信號(hào)通路的作用,明確黑色素瘤惡性增殖、侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控機(jī)制;二是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移研究,利用B16-F10亞型的高轉(zhuǎn)移特性,開展Transwell、尾靜脈移植肺轉(zhuǎn)移等實(shí)驗(yàn),探究黑色素瘤轉(zhuǎn)移的分子路徑,同時(shí)可用于評(píng)估高強(qiáng)度聚焦超聲(HIFU)等治療手段對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制效果;三是藥物篩選與藥效評(píng)估,將該瘤株用于黑色素瘤靶向藥物、hua療藥物、免疫調(diào)節(jié)劑的篩選,評(píng)估藥物對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲的抑制效果,同時(shí)可用于評(píng)估藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞黑色素分泌的影響,為藥物研發(fā)提供可靠的篩選模型;四是免yi治療相關(guān)研究,依托C57BL/6小鼠的免疫特性,將該瘤株用于免疫檢查點(diǎn)抑制劑(如PD-1/PD-L1抑制劑)、CAR-T細(xì)胞治療、CSC-DC疫苗等相關(guān)實(shí)驗(yàn),評(píng)估免yi治療對(duì)黑色素瘤細(xì)胞的殺傷效果,探究IL-12等細(xì)胞因子對(duì)腫瘤免疫微環(huán)境的調(diào)控作用;五是基因功能研究,通過該瘤株開展基因過表達(dá)、沉默實(shí)驗(yàn),探究相關(guān)基因(如蛋白4.1B、IL-12)對(duì)黑色素瘤細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲的影響,明確其抑癌或促癌作用;六是分子機(jī)制驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),可用于Western blotting、Real-time PCR、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證黑色素瘤相關(guān)基因及信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)制,為相關(guān)研究提供分子層面的數(shù)據(jù)支撐。該瘤株適配科研院所、生物醫(yī)藥企業(yè)、高校實(shí)驗(yàn)室及各級(jí)醫(yī)院腫瘤科科研部門,助力相關(guān)科研實(shí)驗(yàn)的順利開展。
備注:(具體細(xì)胞分離、培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)操作方法請(qǐng)參考產(chǎn)品說明書)
儲(chǔ)存與注意事項(xiàng)
儲(chǔ)存方面,該瘤株凍存狀態(tài)下需置于-80℃超低溫冰箱或液氮中保存,有效期為12個(gè)月,凍存時(shí)需使用含5-10%DMSO的配套凍存液,采用梯度降溫法凍存(-1~-2℃/min降溫至-25℃以下,再以-5~-10℃/min降溫至-100℃后浸入液氮),避免細(xì)胞損傷;復(fù)蘇時(shí)需快速解凍(37℃水浴1-2分鐘),解凍后立即用70%酒精消毒凍存管,避免進(jìn)水污染,復(fù)蘇后需立即接種至培養(yǎng)瓶,加入預(yù)熱的專用培養(yǎng)基,置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),復(fù)蘇后24小時(shí)內(nèi)避免更換培養(yǎng)基,確保細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境、穩(wěn)定貼壁;常規(guī)培養(yǎng)狀態(tài)下,細(xì)胞需置于37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中,使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng),定期更換培養(yǎng)基(每2-3天一次),待細(xì)胞融合度達(dá)80%-90%時(shí)傳代,B16傳代可選用含EDTA的yi酶,B16-F10建議選用不含EDTA的yi酶,避免細(xì)胞損傷,傳代比例建議為1:3-1:5,避免細(xì)胞過度融合導(dǎo)致老化。注意事項(xiàng)包括:產(chǎn)品僅供科研使用,不用于臨床治療診斷;細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)需快速解凍,避免反復(fù)凍融,解凍后及時(shí)接種,防止細(xì)胞活力下降,凍存管取出時(shí)需注意防護(hù),避免凍傷;培養(yǎng)過程中需嚴(yán)格遵循無菌操作原則,禁止共用培養(yǎng)耗材,避免細(xì)胞污染,若發(fā)生污染切勿進(jìn)行半量換液,無菌操作是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵;細(xì)胞傳代時(shí)需控制消化時(shí)間(3-5分鐘),避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞貼壁能力下降,傳代時(shí)輕柔吹打,避免劇烈震蕩損傷細(xì)胞;檢測(cè)過程中(如Western blotting、流式細(xì)胞術(shù)),需嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范,確保黑色素標(biāo)志物及相關(guān)分子檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確;過期細(xì)胞及污染細(xì)胞嚴(yán)禁使用,詳細(xì)安全信息請(qǐng)參照產(chǎn)品SDS文件;運(yùn)輸過程中需采用干冰運(yùn)輸,避免高溫、劇烈震蕩,確保細(xì)胞活力,運(yùn)輸后需及時(shí)復(fù)蘇或轉(zhuǎn)移至對(duì)應(yīng)儲(chǔ)存環(huán)境。
訂購信息
如需獲取產(chǎn)品詳細(xì)資料、批次質(zhì)檢報(bào)告或報(bào)價(jià)方案,歡迎聯(lián)系上海拜力生物科技有限公司獲取技術(shù)支持與商務(wù)服務(wù)。
以上信息僅供參考,具體請(qǐng)已產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。