C3H/An小鼠結締組織細胞（L929-TK-）
C3H/An小鼠結締組織細胞（L929-TK-）核心產品為從C3H/An小鼠結締組織中分離、永生化并通過基因編輯敲除TK基因構建的穩(wěn)定細胞株，可提供不同傳代次數的細胞系，配套提供細胞培養(yǎng)說明書、細胞凍存液、復蘇液及質量檢測報告（含細胞純度、TK基因缺失驗證、支原體檢測、成纖維細胞標志物鑒定等），同時提供細胞培養(yǎng)技術支持及定制化實驗服務。該細胞采用yi蛋白酶消化、差速貼壁等成熟分離技術，從C3H/An小鼠結締組織中去除雜細胞，通過成纖維細胞特異性標志物（如波形蛋白Vimentin、α-平滑肌肌動蛋白α-SMA）及TK基因缺失驗證，確保細胞純度≥98%，無支原體、細菌、真菌污染，細胞活性≥90%。該細胞適配常規(guī)貼壁細胞培養(yǎng)條件，可穩(wěn)定傳代，生物學特性穩(wěn)定，保留其貼壁生長、增殖活躍及TK基因缺陷的核心特征，廣泛應用于腫瘤自sha基因治療研究、TK相關藥物篩選、細胞增殖與凋亡調控研究及病毒感染實驗等科研場景，依托C3H/An小鼠的遺傳特性，同時適配腫瘤學、生理學相關研究，為腫瘤學、分子生物學、細胞生物學等相關領域的科研探索、藥物研發(fā)提供核心細胞模型，適配科研院所、生物醫(yī)藥企業(yè)、高校實驗室及各級醫(yī)院科研部門。
分離與培養(yǎng)原理
該細胞的分離與培養(yǎng)核心基于結締組織消化分離、永生化及基因編輯技術，結合C3H/An小鼠結締組織細胞貼壁生長的生物學特性及TK基因缺陷特征，實現細胞的精準分離與體外穩(wěn)定培養(yǎng)，具體核心步驟分為分離、基因編輯和培養(yǎng)三部分：一是細胞分離原理，選取健康C3H/An小鼠，無菌操作下取出結締組織，去除血管、神經等雜組織，碎至1mm3大小的組織塊，加入0.25%yi蛋白酶-EDTA消化液，37℃水浴消化30-40分鐘，期間每5-10分鐘搖動一次，消化完成后加入含胎牛血清的培養(yǎng)基終止消化，用Hanks液漂洗2-3次，800r/min離心5分鐘棄去上清液，通過差速貼壁法去除雜細胞，獲得高純度原代結締組織細胞；二是基因編輯原理，采用CRISPR-Cas9等成熟基因編輯技術，定向敲除原代細胞中的TK基因，經抗性篩選、Western Blot、Real-time PCR等方法驗證，確保TK基因穩(wěn)定缺失，獲得L929-TK-細胞株，TK基因主要參與細胞增殖和分化過程，其缺失可使細胞對特定藥物產生特異性敏感性；三是細胞培養(yǎng)原理，將構建獲得的該細胞接種于培養(yǎng)瓶中，使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，添加青mei素、鏈mei素雙抗，置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)基可維持細胞的正常增殖活力，同時保留其貼壁生長及TK基因缺陷特性，定期更換培養(yǎng)基（每2-3天一次），待細胞融合度達80%-90%時進行傳代，確保細胞正常生長，避免細胞老化或凋亡。此外，所有分離培養(yǎng)的該細胞均需經過細胞活性檢測、純度鑒定、TK基因缺失驗證及污染檢測，確保細胞的穩(wěn)定性和可靠性，為后續(xù)科研實驗提供優(yōu)質細胞模型，同時可通過優(yōu)化培養(yǎng)體系，模擬體內結締組織微環(huán)境，提升細胞體外培養(yǎng)的穩(wěn)定性。
產品特點
該細胞以“純度高、活性強、特征明確、適配性廣"為核心，貼合TK基因相關研究及C3H/An小鼠遺傳背景相關科研需求，核心特點突出，匹配科研實驗對細胞模型的核心訴求。一是遺傳背景均一，源自近交系C3H/An小鼠，基因純合度高，個體差異小，可顯著提升實驗數據的可重復性與可比性，同時繼承該品系補體活性高、對狂犬病毒敏感等特性，適配多領域研究；二是細胞純度高、無污染，細胞純度≥98%，經成纖維細胞特異性標志物鑒定及嚴格污染檢測，無支原體、細菌、真菌及雜細胞污染，確保實驗結果的準確性；三是核心特征明確，TK基因穩(wěn)定缺失，對胸苷激酶相關藥物（如GCV）具有特異性敏感性，可精準用于腫瘤自sha基因治療及藥物篩選相關實驗，同時可作為TK基因功能研究的對照模型；四是生物學特性穩(wěn)定，細胞生長狀態(tài)良好，貼壁性強、增殖迅速，可穩(wěn)定傳代30代以上，傳代過程中TK基因缺失特性不丟失，貼壁生長表型穩(wěn)定，符合科研實驗對數據可重復性的核心要求；五是適配性強，可適配體外常規(guī)貼壁細胞培養(yǎng)、MTT增殖實驗、細胞劃痕實驗、Western blotting檢測、免疫熒光染色、基因轉染、藥物敏感性實驗等多種實驗場景，同時可用于裸鼠體內移植實驗，助力體內外協同研究，還可被TGF-β1誘導轉化為肌成纖維細胞，適配纖維化相關研究；六是操作便捷，提供完整的細胞復蘇、培養(yǎng)、凍存說明書，細胞復蘇成活率高（≥90%），無需復雜實驗設備，常規(guī)貼壁細胞培養(yǎng)條件即可滿足生長需求，適配各類實驗室操作，同時提供TK基因缺失驗證、細胞培養(yǎng)等專屬技術指導。 適用實驗場景
該細胞專為TK基因相關、腫liu治療及結締組織相關科研實驗設計，適配多種體外及體內實驗場景，核心應用包括：一是TK基因功能研究，利用該細胞TK基因缺失的特性，探究TK基因在細胞增殖、分化及腫瘤發(fā)生中的作用，明確其作為細胞異常增殖標記物的相關功能，為基因功能研究提供支撐；二是腫瘤自sha基因治療研究，將該細胞作為模型，探究TK基因介導的自sha基因治療方案，評估GCV等藥物對腫瘤細胞的殺傷效果，為腫瘤基因治療技術研發(fā)提供依據；三是藥物篩選與藥效評估，將該細胞用于TK相關靶向藥物、hua療藥物、抗炎藥物及抗纖維化藥物的篩選，評估藥物對細胞增殖、凋亡、遷移的影響，同時可用于評估藥物對細胞氧化損傷的保護作用，為藥物研發(fā)提供可靠的篩選模型；四是細胞增殖與凋亡調控研究，利用該細胞探究不同因素對結締組織細胞增殖、凋亡的調控機制，分析相關信號通路的作用，為結締組織疾病研究提供支撐；五是病毒感染相關研究，依托C3H/An小鼠對狂犬病毒敏感的特性，將該細胞用于病毒感染機制研究及抗病du藥物篩選；六是分子機制驗證實驗，可用于Western blotting、Real-time PCR、流式細胞術等實驗，驗證TK基因相關信號通路及成纖維細胞轉化相關分子的調控機制，為相關研究提供分子層面的數據支撐。該細胞適配科研院所、生物醫(yī)藥企業(yè)、高校實驗室及各級醫(yī)院科研部門，助力相關科研實驗的順利開展。 備注：（具體細胞分離、培養(yǎng)及實驗操作方法請參考產品說明書）
儲存與注意事項
儲存方面，該細胞凍存狀態(tài)下需置于-80℃超低溫冰箱或液氮中保存，有效期為12個月，凍存時需使用含5-10%DMSO的配套凍存液，采用梯度降溫法凍存（-1~-2℃/min降溫至-25℃以下，再以-5~-10℃/min降溫至-100℃后浸入液氮），避免細胞損傷；復蘇時需快速解凍（37℃水浴1-2分鐘），解凍后立即用70%酒精消毒凍存管，避免進水污染，復蘇后需立即接種至培養(yǎng)瓶，加入預熱的專用培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，復蘇后24小時內避免更換培養(yǎng)基，確保細胞適應環(huán)境、穩(wěn)定貼壁；常規(guī)培養(yǎng)狀態(tài)下，細胞需置于37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中，使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，定期更換培養(yǎng)基（每2-3天一次），待細胞融合度達80%-90%時傳代，避免細胞過度融合導致老化。注意事項包括：產品僅供科研使用，不用于臨床治療診斷；細胞復蘇時需快速解凍，避免反復凍融，解凍后及時接種，防止細胞活力下降，凍存管取出時需注意防護，避免凍傷；培養(yǎng)過程中需嚴格遵循無菌操作原則，禁止共用培養(yǎng)耗材，避免細胞污染，若發(fā)生污染切勿進行半量換液，無菌操作是細胞培養(yǎng)成功的關鍵；細胞傳代時需控制消化時間（3-5分鐘），避免過度消化導致細胞貼壁能力下降，傳代比例建議為1:3-1:5，確保細胞生長密度適宜；檢測過程中（如Western blotting、流式細胞術），需嚴格遵循實驗操作規(guī)范，確保TK基因缺失及相關分子檢測結果準確；過期細胞及污染細胞嚴禁使用，詳細安全信息請參照產品SDS文件；運輸過程中需采用干冰運輸，避免高溫、劇烈震蕩，確保細胞活力，運輸后需及時復蘇或轉移至對應儲存環(huán)境。
訂購信息
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以上信息僅供參考，具體請已產品說明書為準。
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