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人急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞

產(chǎn)品簡介

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更新時(shí)間:2025-06-24
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冷凍細(xì)胞操作步驟:

1.收集對數(shù)生長期細(xì)胞;
2.以25μl臺盼藍(lán)溶液稀釋25μl細(xì)胞懸液;用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)并計(jì)算細(xì)胞存活率(至少應(yīng)該在90%以上);
3.細(xì)胞懸液在4℃ 條件下200磄離心10分鐘;
4.將沉淀的細(xì)胞重新懸浮在冷凍液中(大約5?06細(xì)胞/0.5 ml 冷凍液);
5.將細(xì)胞懸液加入到冷凍管中,每管0.5 ml;
6.將冷凍管置于-80℃冰箱中;
7.24小時(shí)后,將冷凍管移入液氮罐中;
8.在記錄本或電腦中記錄下每一個(gè)冷凍管的位置以確保在以后應(yīng)用時(shí)能夠找到每一個(gè)冷凍管。

傳代方法:
收到細(xì)胞后,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。 (一)如果細(xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整 個(gè)瓶消毒后放到超菌 臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,僅留下 10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼 續(xù)培養(yǎng)。
(二)如果細(xì)胞已長滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中, 倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,然后又 將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30 秒后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓分 散,輕敲幾下培養(yǎng) 培養(yǎng)瓶,細(xì)胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6 傳代;2~3天1次。

注意:傳代后一半用我們的培養(yǎng)基,一半用你們的,以免細(xì) 胞不適應(yīng)而造成生長不好。
凍存方法:凍存液:基礎(chǔ)培養(yǎng)基 +5%DMSO+20%FBS 
儲存:液氮儲存

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