II型肺泡上皮細胞
II型肺泡上皮細胞(Type II Alveolar Epithelial Cells,AEC II),是來源于哺乳動物肺組織的肺泡上皮細胞亞群,為貼壁生長型細胞,是肺泡上皮的主要功能細胞之一,也是肺組織穩(wěn)態(tài)維持、損傷修復(fù)及肺部疾病發(fā)生發(fā)展的核心細胞。該細胞核心功能是合成、分泌肺泡表面活性物質(zhì)(PS),降低肺泡表面張力,防止肺泡塌陷,同時具備自我更新及分化為I型肺泡上皮細胞的能力,是肺損傷后肺泡修復(fù)的關(guān)鍵種子細胞。
檢測原理
該細胞的核心檢測是細胞特異性鑒定、活性檢測、純度檢測及無污染驗證,結(jié)合細胞生物學(xué)、免疫組織化學(xué)及分子生物學(xué)檢測方法,確保細胞系的真實性、功能性與穩(wěn)定性,具體原理如下:一是細胞特異性鑒定,采用免疫細胞化學(xué)(ICC)或Western Blot法,檢測細胞特異性標(biāo)志物(如表面活性蛋白SP-A、SP-B、SP-C、SP-D及細胞角蛋白CK7)的表達,確認(rèn)細胞身份,排除其他肺組織細胞(如I型肺泡上皮細胞、成纖維細胞)污染;二是細胞活性檢測,采用臺盼藍染色法,利用活細胞細胞膜完整、不被臺盼藍染色,死細胞細胞膜破損、被染成藍色的特性,計數(shù)活細胞比例,評估細胞活性;三是細胞純度檢測,通過流式細胞術(shù)檢測SP-A、SP-C等特異性標(biāo)志物的陽性表達率,確保細胞純度≥95%,排除雜細胞污染;四是污染檢測,采用微生物培養(yǎng)法檢測細菌、真菌污染,PCR法檢測支原體污染,確保細胞無外源污染,保障實驗數(shù)據(jù)的可靠性;五是功能驗證,檢測細胞分泌肺泡表面活性物質(zhì)的能力,通過油紅O染色觀察細胞內(nèi)脂滴(表面活性物質(zhì)儲存場所),確認(rèn)細胞具備正常生理功能。
產(chǎn)品特點
本產(chǎn)品針對肺部相關(guān)科研實驗需求優(yōu)化制備,兼具特異性、功能性與實用性,核心特點如下:1. 功能特性完整,完整保留體內(nèi)該細胞的核心功能,可正常合成、分泌肺泡表面活性物質(zhì),具備自我更新及向I型肺泡上皮細胞分化的潛能,適配肺部損傷修復(fù)相關(guān)研究;2. 特異性強,高表達SP-A、SP-B、SP-C、SP-D等該細胞特異性標(biāo)志物,細胞純度高,無其他肺組織雜細胞污染,可特異性用于肺部疾病機制研究;3. 生物學(xué)特性穩(wěn)定,原代細胞可體外短期穩(wěn)定培養(yǎng),永生化細胞可長期傳代培養(yǎng),經(jīng)多代傳代后仍能保留其典型生理功能及標(biāo)志物表達,染色體核型穩(wěn)定(永生化細胞),無明顯變異,保障實驗數(shù)據(jù)的一致性;4. 細胞活力高,產(chǎn)品出廠前經(jīng)嚴(yán)格篩選,原代細胞活力≥90%,永生化細胞活力≥95%,代次控制在適宜范圍,復(fù)蘇后存活率高,可快速適應(yīng)體外培養(yǎng)環(huán)境;5. 無外源污染,經(jīng)嚴(yán)格QC檢測,確保無細菌、真菌、支原體及無關(guān)病毒污染,提供完整檢測報告,包含細胞特異性鑒定及功能驗證數(shù)據(jù);6. 適配性廣,可兼容DMEM/F12、RPMI 1640等多種培養(yǎng)基,支持貼壁培養(yǎng),適配肺部疾病機制、藥物毒理學(xué)、肺泡表面活性物質(zhì)代謝、肺損傷修復(fù)等多種科研實驗場景;7. 實用性強,可直接用于實驗,無需額外進行細胞分離純化操作,廠家提供全程技術(shù)指導(dǎo),包括細胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代及功能檢測相關(guān)操作,降低實驗門檻;8. 來源可靠,細胞均源自健康哺乳動物肺組織(可按需提供人源、鼠源等不同來源),分離培養(yǎng)流程標(biāo)準(zhǔn)化,確保細胞質(zhì)量均一。
適用樣本類型
本產(chǎn)品為細胞成品(原代或永生化),適配各類肺部相關(guān)科研實驗場景,可直接用于相關(guān)實驗操作,其對應(yīng)的原代樣本來源及成品細胞適用的實驗樣本形式如下:原代樣本來源為健康哺乳動物(人、小鼠、大鼠等)肺組織,經(jīng)yi酶消化、梯度離心等方法分離純化后,培養(yǎng)獲得原代細胞;永生化細胞由原代細胞經(jīng)基因改造(如SV40病毒轉(zhuǎn)化)獲得,可長期傳代。成品細胞可直接作為實驗樣本,用于體外培養(yǎng)、藥物處理、分子檢測、免疫實驗、細胞分化誘導(dǎo)、肺損傷模型構(gòu)建等,適配的實驗樣本形式包括細胞懸液、細胞裂解液、細胞爬片、細胞涂片等,可滿足肺部疾病機制研究、藥物篩選、肺泡表面活性物質(zhì)代謝研究、肺損傷修復(fù)機制研究等不同實驗檢測需求。
備注:(具體樣本處理方法請參考產(chǎn)品說明書)
儲存與注意事項
(一)儲存條件
1. 復(fù)蘇狀態(tài)細胞:收到細胞后,立即置于37℃、5%CO?恒溫培養(yǎng)箱中靜置2-3小時,待細胞貼壁后更換新鮮培養(yǎng)基,短期儲存(1-7天)可維持該培養(yǎng)條件,避免頻繁移動培養(yǎng)瓶,避免溫度波動影響細胞貼壁及活性;2. 凍存狀態(tài)細胞:采用液氮(-196℃)長期儲存,凍存液配方為30%基礎(chǔ)培養(yǎng)基(DMEM/F12優(yōu)先)+60%胎牛血清+10%DMSO,分裝至凍存管后經(jīng)程序降溫(4℃30分鐘→-20℃1小時→-80℃過夜→液氮)處理,避免反復(fù)凍融,凍存液可添加適量細胞保護劑,提升細胞復(fù)蘇存活率;3. 未開封配套試劑(如凍存液、復(fù)蘇輔助試劑、專用培養(yǎng)基):2-8℃冷藏避光保存,有效期內(nèi)使用,嚴(yán)禁冷凍,專用培養(yǎng)基建議現(xiàn)配現(xiàn)用。
(二)注意事項
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用,不可用于人類或動物臨床診斷、治療,非藥用、非食用,操作需在BSL-2生物安全實驗室進行,嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范及細胞培養(yǎng)相關(guān)預(yù)防措施,避免細胞污染及實驗人員暴露風(fēng)險;2. 細胞培養(yǎng)過程中,實驗器材需徹di滅菌,移液器吸頭一次性使用,避免交叉污染,建議使用專用培養(yǎng)基及血清,不可擅自更換培養(yǎng)基體系或血清比例,定期觀察細胞貼壁情況、形態(tài)及生長狀態(tài),及時換液、傳代,避免細胞過度密集影響活性及功能;3. 收到細胞后需立即檢查,若出現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液、培養(yǎng)液渾濁、細胞脫落嚴(yán)重或細胞活力異常,及時與廠家聯(lián)系反饋;4. 細胞復(fù)蘇時需快速解凍(37℃水浴5-8分鐘,輕輕搖晃凍存管至wan全融化),避免DMSO損傷細胞,復(fù)蘇后及時離心洗滌(1000rpm,5分鐘),去除凍存液后接種培養(yǎng),培養(yǎng)過夜后檢查細胞貼壁及活性;5. 該細胞為貼壁細胞,傳代時需用yi酶消化(消化時間控制在1-2分鐘,避免過度消化),消化后及時終止,輕柔吹打細胞,避免機械損傷影響細胞功能;6. 定期對細胞進行鑒定,包括特異性標(biāo)志物表達、細胞純度、污染情況及功能驗證(表面活性物質(zhì)分泌),防止細胞變異、污染或功能丟失;7. 凍存細胞復(fù)蘇后建議盡快使用,未使用的細胞需按規(guī)范凍存,避免反復(fù)凍融影響細胞活性及生物學(xué)功能,原代細胞不建議長期傳代,建議在3-5代內(nèi)完成實驗。
訂購信息
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以上信息僅供參考,具體請已產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。